Ткань подготавливают для микроскопического исследования, подвергая срезы ткани, взятые во время обработки, ряду процессов: фиксации, обезвоживанию, очистке, закреплению, разрезанию и окрашиванию.

Обработка тканей
Все кассеты, в которые подаются срезы после обработки, помещаются в процессор тканей. В карусельной модели автоматического процессора ткани, подаваемые в кассетах, помещаются в корзину-носитель и вращаются. проходя через ряд стационарных реагентов, расположенных в круговой карусели. Графики обработки являются гибкими и должны быть стандартизированы лабораторией в зависимости от размера и типа обработки тканей. Пример такого графика:

10% формалин с нейтральным буфером (5 минут)
50% Этиловый спирт (1 час)
70% Этиловый спирт (1 час)
95% Этиловый спирт (1 час)
100% Этиловый спирт (2 часа)
100% Этиловый спирт (2 часа)
100% Этиловый спирт (2 часа)
Ксилол (1 час)
Ксилол (1 час)
Ксилол (1 час)
Парафин (2 часа)
Парафин (2 часа).

Реагенты, используемые для обработки тканей
К реагентам, используемым для обработки тканей, относятся следующие:

Формалин фиксирует или останавливает разложение тканей.
Различные концентрации спирта (70%, 80%, 95% и 100% в указанной последовательности) медленно обезвоживают ткани.
Ксилол — это очищающий реагент, который удаляет спирт из ткани и подготавливает ткань к пропитке парафином.
Жидкий парафин заменяет ксилол и надолго проникает в ткани.

Ручная обработка тканей
Ручная обработка тканей применяется только в случае отключения электроэнергии или поломки автоматического процессора тканей. Ручная обработка — утомительная процедура, требующая работы квалифицированного специалиста. Тканевые кассеты помещают в каждый реагент на указанное время и последовательно по следующему графику:

70% 2-Пропанол (изопропанол) (30 минут)
100% 2-Пропанол (изопропанол) (1 час)
100% 2-Пропанол (изопропанол) (1 час)
100% 2-Пропанол (изопропанол) (1 час)
100% 2-Пропанол (изопропанол) (1 час)
100% 2-Пропанол (изопропанол) (1 час)
100% 2-Пропанол (изопропанол) (1 час)
Ксилол (1 час)
Ксилол (1 час 30 минут)
Парафин (2 часа)
Парафин (2 часа).

Что следует помнить при ручной обработке тканей

На соблюдение графика уходит 13 часов, поэтому выполнить его в обычное рабочее время может оказаться невозможным. По этой причине важно планировать процедуру как можно раньше в тот же день. При необходимости этап 10 (пропитка парафином) сокращается до 1 часа и тканевые кассеты извлекаются из парафина. После этого на следующий день продолжаются шаги 10 и 11, чтобы завершить весь процесс.
Для очистки в ксилоле рекомендуется установить инкубатор на температуру 37°C.
Парафиновую пропитку следует проводить при температуре 58°С в духовом шкафу.

Заливка ткани парафином

Микротомия
Микротомия — это процедура разрезания тонкого среза ткани для помещения на предметное стекло. Парафиновый блок помещают в блок-держатель микротома, обрезают, а затем разрезают несколько срезов толщиной 5 мкм на длинные ленты. Эти ленты плавают в ванночке с теплой водой. Под срез вставляют предметное стекло и поднимают его из воды.

Окрашивание среза H&E
После высушивания в шкафу (при 60°C) предметное стекло пропускают через другую серию химических реагентов (перечислены ниже). Ксилол удаляет парафин, а чистый спирт удаляет ксилол. Затем ткань на предметном стекле регидратируется, чтобы подготовить ее к окрашиванию H&E.

Затем предметные стекла могут быть исследованы патологоанатомом под микроскопом.

Окрашивание H&E для гистопатологии
Процедура:

Поместите стекло со срезом в шкаф (5 минут).
Поместите в ксилол (5 минут).
Поместите в ксилол (5 минут).
Увлажните срез, поместив его в чистый спирт (2 минуты).
Увлажните срез, поместив его в 80%-ный спирт (30 секунд).
Промойте проточной водопроводной водой (1,5 минуты).
Окрасьте гематоксилином (15 минут).
Промойте проточной водопроводной водой (1,5 минуты).
Опустите в 1%-ный раствор уксусной кислоты (2 секунды).
Промойте проточной водопроводной водой (10 минут).
Окрасьте эозином (4 минуты).
Промойте проточной водопроводной водой (1,5 минуты).
Проведите обезвоживание среза, поместив его в чистый спирт (1 минута).
Проведите обезвоживание среза, поместив его в чистый спирт (1 минута).
Очистите в ксилоле.
Закрепите в DPX.

Практические рекомендации по выполнению core-биопсии

Образцы следует поместить в 10% нейтральный забуференный формалин (рН 7,4) сразу после извлечения и незамедлительно отправить в лабораторию.
Оптимальное время фиксации формалином для точного тестирования биомаркеров составляет 6–72 часа.
При обработке записывайте количество образцов и длину каждого образца. При обращении с биоптатами избегайте их раздавливания щипцами.
Биопсия при микрокальцинатах требует рентгенографии, чтобы продемонстрировать, что целевые микрокальцинаты удалены.
Образцы должны располагаться как можно ближе в одной плоскости, чтобы все уровни резки были репрезентативными для образца. Образцы не должны перекрываться.
При обрезке парафинового блока используйте три уровня, расположенных так, чтобы самый глубокий уровень находился примерно на середине блока. Это обеспечивает хороший отбор проб ткани и пригодность для окрашивания H&E.
Уровни между тремя вышеупомянутыми уровнями можно использовать для ИГХ, для тестирования биомаркеров.
При опухолевых образованиях диагностическая ткань присутствует на первом уровне в 98% случаев. Образования, удаленные из-за микрокальцинатов при маммографии, обычно меньше по размеру и обычно требуют большего количества разрезов.