Атлас раннего выявления рака молочной железы

Процедура окрашивания включает в себя:

• Окрашивание для оценки надлежащего качества аспирированного материала;
• окрашивание влажных мазков красителями Папаниколау (Pap) или гематоксилином и эозином (H&E);
• окрашивание высушенных на воздухе мазков любым из красителей Романовского (например, Гимзы, Мая-Грюнвальда-Гимзы (MGG), Райта-Гимзы или Дифф-Квика).

Быстрое окрашивание для определения надлежащего качества аспирированного материала
Для предварительной оценки материала перед отправкой пациентки можно использовать технику быстрого окрашивания. Это делается для того, чтобы убедиться в том, что собрано достаточно материала, а иногда и для постановки предварительного диагноза. Для такой быстрой оценки обычно используется окрашивание толуидиновым синим. Последовательность следующая:

1. Погрузите мазок в спирт минимум на 15 секунд.
2. На весь мазок нанесите 1–2 капли раствора толуидинового синего (0,05 г порошка толуидинового синего, 20 мл 95%-ного спирта и 80 мл дистиллированной воды, перед использованием перемешать и отфильтровать).
3. Закрепите мазок покровным стеклом.
4. Дайте красителю впитаться в течение 10–15 секунд; затем переверните предметное стекло на бумажное полотенце, не снимая покровное стекло. Удалите излишки красителя, слегка надавив на предметное стекло.
5. Осмотрите предметное стекло под микроскопом через 1 минуту.

Если диагностического материала нет, повторите FNAC.

После микроскопической оценки снова погрузите предметное стекло в спирт. Покровное стекло отсоединится, и предметное стекло можно будет окрасить методом Папаниколау (Pap) или H&E.

Большинство цитологических лабораторий проводят влажную фиксацию одних мазков и сухую фиксацию остальных, так что мазки, окрашенные по Папаниколау (Pap) и окрашенные по методу Гимзы, доступны для лучшей дифференциации ядерных и цитоплазматических особенностей. Окрашивание H&E обычно не используется для цитологии, но этот метод доступен в большинстве патологоанатомических лабораторий, поскольку именно этот краситель используется для гистопатологических срезов.


Процедура окрашивания по Папаниколау (Pap)

1. Перенесите предметные стекла непосредственно из фиксатора, не высушивая, в 95% спирт (10 секунд).
2. Поместите предметное стекло в 50% спирт (10 секунд).
3. Аккуратно промойте проточной водопроводной водой (2 минуты).
4. Окрасьте гематоксилином Харриса (3 минуты).
5. Промойте проточной водопроводной водой (2 минуты).
6. Окуните в нашатырный спирт (на 1 минуту).
7. Проведите обезвоживание, поместив в 75% спирт (15 секунд).
8. Проведите обезвоживание, поместив в 95% спирт (15 секунд).
9. Окрасьте оранжево-зеленым 6 (2½ минуты).
10. Промойте 95% спиртом (10 секунд).
11. Окрасьте EA 36 (30 секунд).
12. Промойте в чистом спирте (30 секунд).
13. Промойте в чистом спирте (30 секунд).
14. Поместите стекло в шкаф (5 минут).
15. Промойте в чистом этаноле + ксилоле (1:1) (2 минуты).
16. Очистите в ксилоле (5 минут).
17. Очистите в ксилоле (5 минут).
18. Вымойте ксилол (до полной прозрачности).
19. Закрепите в DPX.

Процедура окрашивания H&E

1. Перенесите предметные стекла непосредственно из фиксатора, не высушивая, в чистый спирт (2 минуты).
2. Поместите в 80% спирт (30 секунд).
3. Промойте проточной водопроводной водой (1,5 минуты).
4. Окрасьте гематоксилином (15 минут).
5. Промойте проточной водопроводной водой (1,5 минуты).
6. Опустите в 1%-ный раствор уксусной кислоты (2 секунды).
7. Промойте проточной водопроводной водой (10 минут).
8. Окрасьте эозином (4 минуты).
9. Промойте проточной водопроводной водой (1,5 минуты).
10. Промойте в чистом спирте (1 минута).
11. Промойте в чистом спирте (1 минута).
12. Очистите в ксилоле (1 минута).
13. Закрепите в DPX.

Процедура окрашивания по методу Гимзы

1. Зафиксируйте мазок метанолом.
2. Налейте рабочий краситель Гимзы (основной краситель Гимзы 1:6, разбавленный забуференной дистиллированной водой с pH 7,2–7,4).
3. Оставьте на 30–35 минут.
4. Промойте предметные стекла водопроводной водой.
5. Высушите и закрепите в DPX.